苹果和山楂制品中展青霉素限量卫生标准

【GB 14974―1994】
 
中华人民共和国卫生部1994-03-18批准 1994-09-01实施

    1　主题内容与适用范围
　　本标准规定了苹果、山楂制品中展青霉素限量及检验方法。
　　本标准适用于苹果、山楂制品及其半成品(原汁、原酱)。
　　2　苹果、山楂制品中展青霉素最高允许量
　　苹果、山楂制品中展青霉素最高允许量见下表。

3　检验方法
　　3.1　原理
　　样品中展青霉素经提取、净化、浓缩、薄层展开后，利用薄层扫描仪进行紫外反射光扫描定量。
　　3.2　试剂
　　3.2.1　硅胶GF254。
　　3.2.2　薄层色谱展开剂　横向：氯仿丙酮(30∶1.5)；纵向：甲苯－乙酸乙酯－甲酸(50∶15∶1)。
　　3.2.3　展青霉素标准品。
　　3.2.4　乙酸乙酯。
　　3.2.5　1.5％碳酸钠溶液。
　　3.2.6　无水硫酸钠。
　　3.2.7　三氯甲烷。
　　3.2.8　显示剂　溶解0.1gMBTH?HCI?H2O 3－甲基－2苯并噻唑酮腙水合盐酸盐于20mL蒸馏水中，置于冰箱中保存，每3天重新配制。
　　3.3　仪器
　　3.3.1　薄层扫描仪。
　　3.3.2　层析槽(内径11.5cm、高20cm的标准缶)。
　　3.3.3　玻璃板10cm×10cm。
　　3.3.4　紫外光灯。
　　3.4　操作方法
　　3.4.1　提取
　　3.4.1.1　果汁、果酒：量取果汁25mL，置于分液漏斗中，加入等体积的乙酸乙酯，振摇2min，静置分层，重复以上步骤两次，合并有机相，加2.5mL1.5％碳酸钠振摇1min，静置分层后，弃去碳酸钠层，同上步骤再用碳酸钠处理一次。将提取液滤入100mL梨形瓶中，于40℃水浴上用真空减压浓缩至近干，用少许氯仿清洗瓶壁，浓缩干，加氯仿0.4mL定容，供薄层色谱测定用。
　　3.4.1.2　果酱：称取样品25g置于乳钵中，加适量无水硫酸钠研磨后，称至三角瓶中，加80mL乙酸乙酯浸泡30min，振荡30min，过滤，取滤液50mL，以下操作同3.4.1.1。
　　3.4.2　测定
　　3.4.2.1　薄层板的制备：取硅胶GF2545g，加水15mL，涂布10cm×10cm玻璃板上，一次涂成5块，薄层厚度为0.3mm，阴干后，105℃烘烤2h，放入干燥器中备用。
　　3.4.2.2　点样：取一块薄板，在距底边和右边10cm处，用微量注射器滴加1.0μg/mL的展青霉素标准液10μL，相距左边4cm处滴加10μL样液，在样品点同一垂直线上，距顶端2cm处点20ng的标准液，为位置参考点。
　　3.4.2.3　展开
　　横向展开到顶端后取出挥干，进行纵向展开，至顶端后，取出挥干，在254nm紫外灯下观察，出现黑色吸收点则样品为阳性。进行扫描定量测定。
　　3.4.2.4　薄层色谱扫描测定
　　仪器操作条件：测定波长270nm；参考波长310nm；反射光测定；扫描速度40nm/min；记录仪纸速20nm/min；测定标准及样品中展青霉素峰面积。
　　3.4.2.5　阳性样品的确证：将阳性样品的薄层色谱板，喷以MBTH显色剂，130℃烘烤15min，冷至室温后，于365nm紫外灯下观察，展青霉素应呈橙黄色点。
　　3.4.2.6　计算
           A          1
果汁：X=c?---?V?D?---………………（1）
           S          V1

            A         1    8
果酱：X=c?---?V?D?---?---…………（2）
            S         W    5 
式中：X――展青霉素含量，μg/mL；
　　c――展青霉素标准液浓度，μg/mL；
　　A――样液展青霉素峰面积；
　　S――标准溶液展青霉素峰面积；
　　V――加入氯仿定容体积，mL；
　　D――样液点稀释倍数；
　　W――样品的重量，g；
　　V1――液体样品的体积，mL。
　　3.5　精密度：变异系数(％)小于10％。
　　3.6　最低检出限：3μg/L。
　　附加说明：
　　本标准由卫生部卫生监督司提出。
　　本标准由中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。
　　本标准主要起草人吴南、刘勇、刘兴?。
　　本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。